РАК ЭНДОМЕТРИЯ И ЭПИГЕНЕТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ГЕНОВ GST И ESR.

© С. М. Карташов, Е. А. Акулина, А. Г. Калаева, 2009 УДК 618.14-006-036:575.113

РАК ЭНДОМЕТРИЯ И ЭПИГЕНЕТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ГЕНОВ GST И ESR.

Проф. С. М. Карташов, доц. Е. А. Акулина, А. Г. Калаева

У 159 больных раком эндометрия I-III стадии методом ПЦР изучено наличие метилирования генов GST и ESR в сыворотке крови. Показано, что частота эпигенетических нарушений функции гена ESR имеет достоверные колебания от стадии заболевания (I стадии- 48,4%; II ст. - 67,7%; III стадии- 45,5%), а частота метилирования гена GST увеличивается по мере прогрессирования рака эндометрия: 24,2; 46,6 и 58,1% соответственно стадии. Достоверной связи между эффективностью химиотерапии и наличием метилирования генов GST и ESR не прослежено.

Харьковская медицинская академия последипломного образования

Рак эндометрия (РЭ) остается одной из наибо­лее распространенных форм новообразований у женщин во многих странах мира. В Украине пока­затель заболеваемости РЭ за последние десять лет увеличился с 20,7 до 25,7 на 100 000 населения, но, что особенно актуально, рост заболеваемости РЭ происходит в группе женщин молодого возраста [1, 5]. Нарастание частоты РЭ нельзя объяснить только увеличением средней продолжительности жизни - оно связано и с прогрессирующим ростом болезней цивилизации, и с увеличением количес­тва генетических нарушений. Указанные факторы говорят о необходимости использования новых критериев как для определения риска развития карциномы эндометрия, так и для прогнозирования течения заболевания [3]. Среди генетических фак­торов при РЭ активно изучается роль генов GST и ESR [8, 9, 10]. По данным литературы, механизмы вовлечения генов GST и ESR в процесс малигни-зации и прогрессии РЭ остаются малоизученными [8, 10], однако большинство авторов склоняются к необходимости изучения эпигенетических на­рушений данных генов, в частности к вопросу метилирования генов, которое приводит к нару­шению транскрипции без его мутации, то есть к невозможности функционирования гена [8, 10].

Учитывая, что многие факторы, участвующие в

канцерогенезе, оказывают влияние и на прогрессию заболевания, и на эффективность терапевтических воздействий, мы решили оценить влияние метили­рования генов на эффективность химиотерапии (ХТ) и определить связь между распространенностью процесса и наличием эпигенетических нарушений данных генов [6, 7].

Цель исследования - изучить связь между час­тотой метилирования генов GST, ESR, стадией РЭ и эффективностью применяемой ХТ.

Материалы и методы

Обследовано 159 больных I-III ст. (Т1а-3вШ-1М0), из которых эндометриоидный рак был об­наружен у 122 больных, а неэндометриоидный рак - у 37 больных. Возраст больных колебался от 34 до 78 лет, а средний возраст составил 61,1±2,7 года. Во всех исследуемых случаях диагноз был верифицирован морфологически. У всех больных в опухолевой ткани методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) было изучено наличие метилирования генов GST и ESR в сыво­ротке крови. После выделения ДНК из сыворотки крови определяли метилирования промоторной области генов GST и ESR, для чего ДНК обра­батывали метилчувствительными рестриктазами. Поиск сайтов рестрикции осуществлялся с помощью

программы «WIN-SUN». Исследования проводили в лаборатории «Вирола» ХМАПО. Все больные в послеоперационном периоде получали лучевую терапию. У 68 больных II ст. и III стадии рака эндометрия в послеоперационном периоде прово­дилось 4 курса ХТ на основе препаратов платины: 35 больным по схеме САР и 33 - по схеме СР. Дозы соответствовали следующим дозам химиопрепаратов в неделю: цисплатин - 20 (САР) - 25 (СР) мг/м2; циклофосфан - 150 и 250 мг/м2 соответственно; доксорубицин - 15 мг/м2. При статистической обработке данных приме­няли t-критерий Стьюдента. Полученные резуль­таты представлены в виде М±ш. Различия считали достоверными при р<0,05.

Результаты и их обсуждение

При изучении частоты метилирования исследу­емых генов в зависимости от стадии заболевания установлено, что у больных с I ст. процесса эпиге­нетическое нарушение гена ESR выявлено в 2 раза чаще, чем GST; при II стадии в 1,5 раза чаще, а при III стадии рака тела матки в 1,3 раза реже, чем наличие метилирования гена GST (табл. 1).

Метилирование гена GST обнаружено у 22 (24,2±4,5%) больных РЭ I стадии, при этом у пациенток со стадиями T1a, T1b и T1c этот пока­затель достоверно не отличается: 4 (19,0±8,5%), 9 (25,0±7,2%) и 9 (26,5±7,6%) больных соответ­ственно (р>0,05).

У пациенток II ст. процесса метилирование гена GST обнаружено в 46,0±8,9% случаев, что достоверно выше соответствующего показателя при начальных стадиях. У больных раком тела матки III ст. значение этого показателя повышается и составляет 58,1±8,9% случаев.

При анализе данных, полученных в ходе выяв­ления метилирования гена ESR, установлено, что у пациенток  II стадии рака эндометрия этот показатель досто­верно выше соответствующего значения у больных с I и II стадией процесса: I ст. - 44 (48,4±5,2%) больные; II ст. - 25 (67,6±7,7%) больных; III стадии - 14 (45,2±8,9%) пациенток (р<0,05). При этом в пределах одной стадии РЭ частота встречаемости ме­тилированного гена ESR достоверно не различается, например, при стадии T1a - 42,8±10,8% случаев; при T1b - 47,2±8,3% случаев; при T1c - 52,9±8,6% случаев (р>0,05). Аналогичные данные отмечены при II и III ст. опухолевого процесса.

У части больных в процессе лечения или на­блюдения был обнаружен рецидив заболевания, а у части женщин - продолжение процесса, что в совокупности нами расценено как отсутствие эффекта от ХТ. Нами оценена эффективность применения ХТ в зависимости от метилирования генов GST и ESR (табл. 2).

В группе женщин с II-III стадией заболева­ния рецидив РЭ встречался в 17,6±4,4% случаев (у 12 больных из 68). У больных контрольной группы отсутствие эффекта от ХТ нами было отмечено в наименьшем проценте случаев - в 9,1%. В группе пациенток из 15 человек с наличием метилированного гена GST рецидивирование РЭ встречалось несколько чаще - в 13,3% случаев (у 2 больных). Худший эффект от проводимой ХТ нами отмечен в группе больных РЭ, у которых были выявлены эпигенетические нарушения гена ESR: частота рецидивирования РЭ оказалась равной 22,7%. В случаях метилирования обоих исследуемых генов частота рецидивирования заболевания также оказалась достаточно высокой (20,0%), но несколько ниже, чем у больных, имеющих нарушение фун­кции только одного гена ESR. Следует отметить, что все выявленные нами закономерности связи между эффективностью применения ХТ и наличием или отсутствием метилирования генов GST и ESR прослежены только в виде тенденции в связи с отсутствием статистически достоверных различий. В ходе проведения исследования установлено, что частота метилирования гена ESR имеет четкую тенденцию к росту по мере увеличения распро­страненности опухолевого процесса. Качественный скачок, сопровождающийся достоверным увели­чением частоты эпигенетических нарушений гена ESR, происходит при переходе I стадии рака тела матки во II стадию. Дальнейшее прогрессирование опухолевого процесса сопровождается тенденцией к снижению частоты встречаемости метилирования данного гена. Увеличение показателя частоты встре­чаемости метилирования гена GST также зависит от распространенности процесса и прогрессивно увеличивается по мере прогрессирования заболева­ния. Достоверные различия отмечены при сравни­тельном анализе количественных значений данного показателя у больных раком тела матки I и II ст.; I и III ст. Между значениями показателя встреча­емости эпигенетических нарушений гена GST у пациенток РЭ II и III ст. достоверных различий не выявлено. Кроме того, выявленные нами факты учащения возникновение рецидива у больных РЭ с эпигенетическими нарушениями гена ESR и обоих генов (GSTii ESR) на фоне проведения схем ХТ на основе препаратов платины являются основанием как для дальнейшего изучения данной тенденции, так и могут служить одними из дополнительных рекомендаций при определении тактики лечения больных с распространенными формами РЭ.

Выводы

1. Частота эпигенетических нарушений функции гена ESR у больных РЭ достоверно возрастает от I ст. (48,4%) ко II ст. (67,7%) и уменьшается до 45,5% у пациенток III ст.

2. Частота метилирования гена GST также зависит от распространенности процесса и увеличивается по мере прогрессирования заболевания: 24,2%, 46,6% и 58,1% соответственно стадиям РЭ.

3. У больных РЭ II и III ст. не прослежено досто­верной связи между эффективностью исполь­зования ХТ на основе препаратов платины и наличием эпигенетических нарушений генов GST и ESR.

Выявление у больных РЭ II и III ст. эпигене­тических нарушений гена ESR или обоих генов (GST и ESR) является перспективным и служит отрицательным прогностическим фактором при назначении схем ХТ с включением препаратов платины.

Литература

1. Берштейн Л.М. Эпидемиология, патогенез и пути профилактики рака эндометрия: стабильность или эволюция? // Практическая онкология. - 2004. -

Т. 5, № 1. - С. 1-8.

2. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии. - Л.: Медицина, 1989. - 464 с.

3. Бучинская Л.Г., Полищук Л.З., Воробьева Л.И. и др.

Экспрессия маркеров пролиферации в клетках аде-нокарцином эндометрия // Онкология. - 2004. - Т. 6, № 4. - С. 265-268.

4. Воробьева Л. И., Жилка Н.Я. Анализ деятельности онкогинекологической службы Украины в 2002 году

/ МЗ Украины. - К.: Морион, 2003. - 14 с.

5. Чулкова О. В. Предрак и рак эндометрия у женщин репродуктивного возраста: Автореф. дисс. ... д-ра мед. наук: 14.01.07 / Московский медицинский ин­ститут. - М., 2003. - 34 с.

6. David S. Waxman. GST: Role in alkylating agent resistance and possible target for modulation chemotherapy-a

review // Cancer Research. - 1990. - P. 649-654.

7. Jason R Navari, Philip Y. Roland, Pacita Keh et. al. Loss of estrogen receptors expression in endometrial tumors

is not associated with de novo methylation of the ERS gene // Clinical Cancer Research. - 2000. - Vol. 6. -

P. 426-432.

8. Macleod Kay. Tumor suppressor genes // Current opinion in genetics and development. - 2000. - Vol. 10. -

P. 81 -93.

9. Masahiro Sasaki, Loulia Kotcherguina, Abhipsa Dharia et al. Cytosine-phosphoguanine methylation of estrogen receptors in endometrial cancer // Clinical Cancer Research. - 2001. - Vol. 15. - P. 362-366.

10. SambrookEE., Fritsch R., ManiatisS.K. Molecular cloning // Cold Spring Harbor. Laboratory Press. - 1989. - Vol. 8. - P. 250-256.