ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

ИССЛЕДОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВИЗУАЛИЗАЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОНТРАСТНЫХ ВЕЩЕСТВ В НИЗКО-ПОЛЕВОЙ ТОМОГРАФИИ

Балакин В.Е.^т, Биктимиров Э.Ф.¹²‘, Гилязутдинов И.А.‘³‘, Жаворонков А.Е.‘³‘ Салихов К.М.‘²‘, Сахапова Л.Р.‘⁴‘, Фаттахов Я.В.¹²‘, Хабиров Р.А.¹⁴¹, Хасанов Р.Ш.¹⁵‘, Хафизов Р.Т.¹⁶‘, Юсупова Л.Р.¹⁷‘

¹ - Физико-технический центр Физического института им. П.Н. Лебедева РАН,

Протвино, Россия,

² - Казанский физико-технический институт им. Е.В. Завойского КазНЦ РАН, Казань,Россия,

³ - Республиканский клинический онкологический диспансер, Казань, Россия,

⁴ - Клиника Казанского медицинского университета, Казань, Россия,

⁵ - Приволжский филиал РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Казань, Россия,

⁶ - Байер Шеринг Фарма;

⁷ - Казанский государственный университет, Казань, Россия

Целью исследования является оценка эффективности визуализа­ции с применением контрастных веществ (КВ) при обследовании па­циентов на низко-полевом томографе «ТМР-0.06-КФТИ» с индукцией магнитного поля 0.06 Тл.

Проанализированы литературные данные с целью оценить конт­растные вещества с физической и медицинской точки зрения, выбора наиболее подходящие для обследования на низко-полевом томогра­фе. Критерии, по которым нами было отобрано КВ: степень конт­растирования слабо зависит от величины магнитного поля, концен­трация КВ поддерживается в организме на достаточном уровне для проведения обследования на низко-полевом томографе, КВ хорошо переносится пациентом.

Результаты исследования на низко-полевом томографе сравнива­лись с данными обследования на высоко-полевых МРТ с индукцией магнитного поля 1.5 Тл. с применением и без контрастных веществ.

Наши предварительные исследования показали, что «Гадовист» наиболее эффективен для контрастирования новообразований в низ­ких полях. Определена динамика нарастания контраста в организме для нахождения оптимального момента начала и длительности об­следования на томографе. Проведены МР- исследования пациентов с различными онкологическими заболеваниями головного мозга и позвоночника: менингеома, невринома, метастазы.

Использование КВ позволило достоверно оценить эффективность визуализации истинного объема и распространенности опухолевого поражения головного мозга и других органов при обследовании на низко-полевом томографе.

ПРИМЕНЕНИЕ ИЗБИРАТЕЛЬНОЙ ХРОНОФОТОТЕРАПИИ С ХЛОРИНОМ Е6 У БОЛЬНЫХ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ В ОБЛАСТИ ГОЛОВЫ И ШЕИ:

ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА

Борисов В.А., Гусева ОА.*, Григорян С.С.*

Центр избирательной хронофототерапии, Москва, Россия, *ГУНИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва, Россия

Применение традиционных методов лечения (лучевой, хирур­гический) больных со злокачественными опухолями головы и шеи обеспечивает невысокий процент выживаемости (20-45%), т.к. способствует усугублению срыва иммунных механизмов сопро­тивляемости, вызванного антииммунным действием опухоли. Для коррекции возникших иммунологических нарушений применяли метод избирательной хронофототерапии (ИХФТ) с хлорином Е6.

Курс реабилитации проходили 18 человек со злокачественны­ми опухолями головы и шеи III-IV стадии. Помимо оценки клини­ческого состояния больного, томографического, гистологического обследования и ПЭТ проводили иммунологическое исследование, направленное на выявление нарушений в клеточном иммуните­те. Методом иммунофенотипирования определяли следующие маркеры лимфоцитов: CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD38, CD54, CD71, CD95.

У всех больных отмечались: недостаточность Т-клеточного им­мунитета, нарушения в системе моноцитов/макрофагов, низкая спо­собность лимфоцитов к апоптозу, завышенный уровень NK-клеток и неактивированных В-лимфоцитов.

В ходе реабилитации методом ИХФТ с хлорином Е6 количество Т-лимфоцитов резко увеличивалось за счет возрастания Т-хел-перов (50%) и/или цитотоксических Т-лимфоцитов (50%). Воз­растал уровень активации Т- и В-клеток (CD38), моноцитов/мак­рофагов (CD54). Отмечалась тенденция к повышению экспрессии CD95 - маркера апоптоза. Одним из критериев оценки тяжести опухолевого процесса является высокий уровень экспрессии CD71. У первичных больных этот показатель на 7-10% превышал физиологическую норму. После проведения ИХФТ с хлорином Е6 экспрессия CD71 снижалась в 2 раза.

Таким образом, применение ИХФТ с хлорином Е6 стимулирует мобилизацию иммунных механизмов сопротивляемости опухо­левому росту, что, возможно, приведет к повышению процента выживаемости больных со злокачественными опухолями головы и шеи.

86

ONCOSURGERY

III КОНГРЕСС C МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «ОПУХОЛИ ГОЛОВЫ И ШЕИ»

БИОУПРАВЛЯЕМАЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ И РЕАБИЛИТАЦИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

Борисов ВА, Загускин С.Л.

Центр биохронотерапии, Москва, Россия

При фотодинамической терапии (ФДТ) в настоящее время используются фотосенсибилизаторы, имеющие максимум погло­щения в красной области спектра. Пороговая для деструкции рако­вых клеток плотность мощности в этой области спектра сохраняется только для поверхностно расположенных опухолей. Цель работы -разработка методики деструкции глубокорасположенных опухолей и комплекса реабилитации онкологических больных после хирур­гических операций, лучевой и химиотерапии.

Использованы лазерные диодные модули ML500-SP и Sunny (PDT-662), предназначенные для ФДТ с хлорином Е6 и цифровой ин­дикацией интенсивности флюоресценции. С помощью дополнитель­ного разработанного нами устройства биоуправления по сигналам с датчиков пульса и дыхания, установленных на теле пациента, осуществлялась биосинхронизация лазерного воздействия только в фазах выдоха и диастолы (моменты уменьшения кровенапол­нения ткани). Плотность мощности, длительность воздействия и соотношения глубин амплитудной модуляции несущей частоты 22,5 кГц по сигналам пульса, дыхания и тремора выбирали в со­ответствии размерами и типом опухоли, с наличием и характером дисбаланса артериальной и венозной частей капиллярного русла в месте локализации опухоли. Применяли комплекс реабилита­ционных мероприятий, включающий восстановление клеточного и гуморального иммунитета, нормализацию показателей крови и основных функций организма.

Результаты реабилитации более тысячи больных, включая 72 пациента с глиомами мозга и опухолями шеи, при 14% положи­тельного эффекта указывают на перспективность использован­ной методики. Фактическое отсутствие интоксикации у больных, подвергавшихся ФДТ в режиме биоуправления, свидетельствует в пользу предположения об индукции апоптоза клеток опухоли со стороны поверхностно расположенных клеток. Лазерная биосинх­ронизация ритмов золь-гель переходов в этих клетках, вероятно, обеспечивает генерацию собственных излучений этих нормальных клеток, воздействующих на клетки опухоли. Эффект зависит от комплекса реабилитационных мер.

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ

ЛЕЧЕНИЯ РАКА ГОРТАНИ

ПО ОБЪЕМУ РЕГРЕССИИ ОПУХОЛИ И СОСТОЯНИЮ ИММУНИТЕТА

Буякова М.Е., Кузьмина Е.Г., Андреев В.Г., Вдовина С.Н., Панкратов В.А.

ГУ МРНЦ РАМН, Обнинск, Россия

Задача. Сопоставить эффективность химиолучевого лечения больных раком гортани с состоянием иммунитета.

Материалы и методы. В исследование включены 94 боль­ных раком гортани 3 стадии. Лечение начинали с лучевой терапии в традиционном режиме фракционирования до СОД 30-40Гр с одно­временным применением полихимиотерапии и воздействия инфра­красного лазера на область гортани в течение 10 мин перед облу­чением. Через 2 недели визуально оценивали регрессию опухоли: при регрессии более 50% продолжали лучевую терапию, менее 50% проводили хирургическое лечение. Сравнили реакцию иммунной сис­темы больных на проведенную терапию.

Методом проточной цитофлуориметрии определяли основные попу­ляции и субпопуляции иммунокомпетентных клеток Т-, В-, НК-клеток, активацию Т-клеток, уровни сывороточных иммуноглобулинов М, G, A-классов и циркулирующих иммунных комплексов, цитотоксичность естественных киллеров, фагоцитарную активность (ФГА) нейтрофилов.

Результаты. Больные разделились на 2 группы : первая 64 че­ловека (68%) - регрессия опухоли более 50%, вторая 30 человек (32%) - менее 50%. В первой группе отмечено снижение до нормы исходно повышенных уровней лейкоцитов и лимфоцитов, определен­ная степень снижения ниже нормы количества Т- и В-клеток и про­лиферации Т-клеток, индуцированной ФГА. Во 2-й группе снижение числа Т- и В-клеток выражено сильнее. Кроме того, отмечено разви­тие более сильных местных воспалительных постлучевых реакций, что выражалось более значительным повышением уровня сыворо­точного иммуноглобулина А-класса.

Заключение. Отмечается высокая эффективность химиолуче-вого лечения рака гортани 3 ст. Регрессии опухоли более 50% достигнута у 68%, больных с меньшей степенью компрометации состояния иммунной системы. Регрессия опухоли менее 50% про­исходит на фоне большей индивидуальной радиочувствительнос­ти клеток иммунной системы и сопряжена с развитием местных постлучевых реакций.

ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ЗОН ПОРАЖЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА

ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ АЛГЕБРАИЧЕСКИХ

ОПЕРАЦИЙ С ИЗОБРАЖЕНИЯМИ

В МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ТОМОГРАФИИ

Губский Л.В., Анисимов Н.В., Гуляев М.В., Пирогов Ю.А.

ЦМТС МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

Рассматривается способ обработки данных в магнитно-резо­нансной томографии (МРТ), основанный на алгебраических опера­циях (вычитание, умножение и т.д.) с идентичными по локализации изображениями. Целью операций является улучшение диффе­ренциации тканей и эмуляция МР-изображений, которые невоз­можно получить при обычном сканировании. Выбор алгебраичес­ких операций основан на известной теоретической зависимости МР-сигналов от параметров использованных режимов сканиро-ания и влиянии на яркость пикселов МР -изображения алгебраи­ческих операций над этими изображениями.

Материалы и методы. На 0.5 Тл томографе Tomikon_S50_ (Bruker) получены изображения в режимах T2, FLAIR (TI = 1300 мс), STIR(TI=80 мс), DIRa (TI1/TI2 = 1300/80 мс), DIRb (TI1/TI2=550/80 мс) при TR/TE=5600/80 мс. Для эмуляции режимов STIR или FLAIR производилось поточечное вычитание изображений, соответственно: T2-FLAIR или T2-STIR. Для эмуляции режимов с одновременным подавлени­ем сигналов нормальной ткани производилось перемножение разностных изображений с FLAIR и STIR. Кроме того, перемножались FLAIR и STIR, а также DIRa и DIRb.

Результаты. Операция вычитания T2-FLAIR давала результат, аналогичный режиму STIR, что способствовало выявлению дермоид-ных кист, образований в подкожно-жировой клетчатке, дифферен­циации тканей у основания черепа. В некоторых случаях операция (T2-FLAIR)xFLAIR давала результат, аналогичный режиму DIR, что позволило выявить послеоперационные изменения в оболочках мозга. С помощью операции (T2-FLAIR)xFLAIR было реализовано селективное выделение дермоидной кисты на МР-изображении в виде зоны гипе­ринтенсивного сигнала на темном фоне. При операции (DIRa)x(DIRb) эмулировалось подавление сигналов от 3 тканевых компонентов - воды, жира и отечно-воспалительных изменениях слизистых носа и его при­даточных пазух, что обеспечивало наиболее благоприятные условия визуализации внутричерепных объемных образований.

Выводы. Применение алгебраических операций с МР-изображени-ями позволяет повысить информативность МРТ исследований за счет эмуляции дополнительных режимов сканирования, что особенно полез­но при исследовании внутричерепных объемных образований.

ОНКОХИРУРГИЯ

87

III INTERNATIONAL CONGRESS «TUMOURS OF THE HEAD AND NECK»

ПРИМЕНЕНИЕ МИЛЛИМЕТРОВОЙ ТЕРАПИИ ПРИ УЗЛОВОМ ЗОБЕ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Гуляев А.И., Лисенкова Л.А., Синицын Н.И, Ёлкин ВА.

Саратовский филиал Института радиотехники и электроники им. В.А. Котельникова РАН, Саратов, Россия

Хотя узел в щитовидной железе всегда вызывает онкологическую настороженность и предполагает необходимость исключения злока­чественного новообразования, стоит вопрос о развитии максимально доступных, ненагрузочных и максимально атравматичных методов лечения.

При планировании исследований в области использования мил­лиметровой (КВЧ) терапии при заболеваниях щитовидной железы вопрос о вероятности её эффективного применения при узловом зобе казался нам по меньшей мере дискуссионным, поскольку в подавляющем большинстве исследователи скептически относи­лись к представлению о возможности обратного развития истинной доброкачественной опухоли под воздействием низкоинтенсивно­го неионизирующего КВЧ-излучения. Действительно, получение таких результатов отчасти противоречило бы ряду современных представлений о закономерностях опухолевого роста. В частности, в своих работах мы сами подчёркивали, что наличие истинных узлов щитовидной железы является абсолютным показанием к хирургичес­кому лечению. Тем не менее, в наших наблюдениях отмечается ряд клинических результатов, когда воздействие миллиметровыми вол­нами на резонансных частотах воды на проекцию щитовидной железы у пациентов, у которых были диагностированы узлы щитовидной же­лезы, отмечалось значительное уменьшение или полное исчезнове­ние таких узлов. Специально следует отметить, что у этих пациентов КВЧ-терапия стала применяться нами только после их собственного категорического отказа от оперативных вмешательств.

Наши наблюдения демонстрируют эффективность применения КВЧ-терапии при наличии диагностированной истинной доброкачес­твенной опухоли щитовидной железы на фоне тяжёлой генетической отягощённости по тиреоидной патологии и онкозаболеваниям.

Часть больных узловым зобом после проведённой миллиметро­вой терапии всё же перенесли хирургическое лечение. Проведённое после операций патогистологическое исследование показало, что в этих наблюдениях ни разу не было выявлено признаков злокачест­венного роста, в то время как у пациентов наблюдалось улучшение течения основного заболевания и общего состояния.

На основании данных клинически весьма успешно протекавших наблюдений, разумеется, невозможно делать далеко идущие выво­ды об окончательных рекомендациях при наличии истинных узлов щитовидной железы. Тем не менее, пройти мимо таких наблюдений было бы неправильно. В то же время, если дальнейший клинический опыт подтвердит возможность эффективного использования КВЧ-терапии при узловых формах зоба, это позволит поставить вопрос о возможности обоснованного выбора не связанных с оперативным вмешательством атравматичных, ненагрузочных методов лечения при данной патологии, которую большинство авторов и мы сами до последнего времени считали абсолютным показанием для хирурги­ческого лечения. При применении разработанного терапевтического метода не отмечено отрицательных побочных эффектов.

Следует особо подчеркнуть, что сочетание миллиметрового излучения с воздействием на облучаемую зону щитовидной железы наноструктурированной поверхности ряда натуральных минералов кристаллической структуры, как впервые показали исследования авторов, приводит к увеличению эффективности и глубины про­никновения КВЧ-излучения в ткани, улучшению микроциркуляции крови за счёт развития процессов структуризации внутритканевой воды и, в итоге, к увеличению эффективности терапии. На данном пути открываются перспективы рождения нового прогрессивного на­правления в биомедицинской радиоэлектронике - миллиметровой наноструктурной медицины (КВЧ-кристаллотерапии).

Данные исследования частично поддержаны грантом № 08-02­00987 (02-910) РФФИ.

ХИРУРГИЧЕСКОЕ ЛЕЧЕНИЕ ГИПЕРВАСКУЛЯРНЫХ ОПУХОЛЕЙ ГОЛОВЫ И ШЕИ

С ПРЕДОПЕРАЦИОННОЙ ЭМБОЛИЗАЦИЕЙ

Залуцкий И.В., Белоцерковский И.В., Акинфеев В.В.

ГУ РНПЦ онкология и медицинская радиология им. Н.Н. Александрова, Минск, Беларусь

Цель. Определить эффективность предоперационной эмболизации при хирургическом лечении гиперваскулярных опухолей головы и шеи.

Материалы и методы. Произведен анализ хирургического лечения 55 больных 20(36%) женщин, 35( 64%) мужчин, возраст от 8 до 65 лет, средний возраст - 36 лет).

В 17 (31%) случаях была каротидная параганглиома, в 4(7%) -вагальная, в 12 (22%) - югулярная, в 22 (40%) - ювенильная ан-гиофиброма носоглотки. Всем больным за 3-5 дней до операции вы­полнялась каротидная ангиография и эмболизация ветвей наружной сонной артерии (НСА), кровоснабжающих опухоль. В качестве эмбо-лизирующих веществ использовались частицы гемостатической губки и микроспирали - 20 случаев, частицы поливинилалкоголя (ПВА) -18 случаев, микросферы ПВА (Bead Block) - 17.

Результаты. После проведения эмболизации на ангиограммах за­фиксирована тотальная деваскуляризация - 44 (80%) случаев, суб­тотальная - 11 (20%). 53 (96%) пациента прооперированы через 3-5 дней после эмболизации. У 2 (4%) пациентов во время эмболизации произошел малый ишемический инсульт (с восстановимым невроло­гическим дефицитом), и эти больные прооперированы через 14 дней. Средняя кровопотеря составила 134,2±9,6 мл (p<0,001).

Заключение. Применение предоперационной эмболизации вет­вей НСА у больных гиперваскулярными опухолями головы и шеи позволяет выполнить радикальное хирургическое вмешательство со значительным уменьшением интраоперационной кровопотери.

ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ У БОЛЬНЫХ ОПУХОЛЯМИ

ГОЛОВЫ И ШЕИ

Клишо Е.В., Кондакова И.В., Чойнзонов Е.Л., Шишкин Д.А., Черемисина О.В., Чижевская С.Ю.

ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, Томск, Россия

Для прогноза развития плоскоклеточных карцином головы и шеи (ПКГШ) часто возникает потребность в дополнительных прогности­ческих маркерах, среди которых особое место занимают матриксные металлопротеиназы (ММП).

Материалы и методы исследования. Исследована сыворотка 112 больных ПКГШ стадии T_1-3N_0-3M₀, забранная до начала лечения, методом ИФА. Значимость ферментов оценивали однофакторным анализом прогностической значимости признаков с помощью крите­рия Гехана-Вилкоксона и log-рангового критерия.

Результаты. Общая 2-летняя выживаемость была достоверно выше у больных ПКГШ при уровне содержания ММП-9 в сыворотке крови менее 550 нг/мл по сравнению с больными, у которых было более высокое содержание фермента (р<0,01). Учитывая, что про-грессирование опухолевого процесса у 30,4% больных происходило за счет развития рецидивов опухоли, было выявлено, что безреци­дивная выживаемость достоверно выше у больных с содержанием ММП-9 в сыворотке крови ниже 550 нг/мл по сравнению с боль­ными с более высоким уровнем ММП-9 (р<0,05). Кроме того, без­метастатическая выживаемость была достоверно выше у больных с уровнем содержания ММП-2 в сыворотке крови менее 250 нг/мл и с уровнем содержания ММП-9 менее 550 нг/мл чем у больных с более высоким содержанием ферментов (р<0,01).

88

ONCOSURGERY

III КОНГРЕСС C МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «ОПУХОЛИ ГОЛОВЫ И ШЕИ»

Заключение. Высокий уровень содержания ММП-9 в сыворотке крови является признаком плохого прогноза 2-хлетней общей, без­рецидивной и безметастатической выживаемости больных ПКГШ. Высокая вероятность возникновения метастазов у больных опухо­лями головы и шеи связана с высокими уровнями как ММП-2, так и ММП-9 в сыворотке крови, исследованной до начала лечения.

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ СОСТОЯНИЯ АНТИОКСИДАНТНОГО-ПРООКСИДАНТНОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ МЕСТНО-РАСПРОСТРАНЕННЫМ ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ ГОЛОВЫ И ШЕИ

Масленникова А.В., Щербатюк Т.Г., Лазарева В.А, Давыденко Д.В., Герасимова А.В.

ГОУ ВПО НижГМА Росздрава, Нижний Новгород, Россия

Цель - оценить значение показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы в отношении исхода заболева­ния у больных местно-распространенным плоскоклеточным раком головы и шеи.

Материалы и методы. С октября 2005 по март 2008 года в исследование были включены 65 больных раком полости рта, глотки и гортани III-IV стадии. Всем пациентам проводился один индукци­онный курс ПХТ, затем одновременное химиолучевое лечение рас­щепленным курсом до СОД 68-72 Гр. До начала лечения осущест­влялось исследование активности свободнорадикальных процессов: состояние прооксидантного статуса определяли по содержанию в плазме малонового диальдегида (МДА), состояние ферментативно­го звена антиоксидантного статуса - по содержанию супероксиддис-мутазы (СОД) и каталазы эритроцитов.

Результаты. В зависимости от исхода заболевания пациенты разделились на 2 группы. В группу «благоприятного прогноза» вошли 36 больных, завершивших лечение в соответствии с планом, про-грессирование у которых возникло не ранее, чем через 6 месяцев после окончания лечения. Общая одногодичная выживаемость в дан­ной группе оказалась равной 91,1%, трехлетняя - 38%, медиана выживаемости - 20 месяцам. Среднее содержание МДА составило 3,35±1,18 единиц, средняя активность супероксиддисмутазы -153,53±15,37 единиц, каталазы - 26,19±0,73 единиц. Двадцать два пациента вошли в группу, условно названную группой «неблаго­приятного прогноза». Все больные из этой группы умерли в течение 12 месяцев с момента начала лечения, медиана выживаемости в ней оказалась равной 5 месяцам. Средний уровень МДА в группе «неблагоприятного прогноза» составил 10,92±3,09 относительных ед., активность супероксиддисмутазы - 15,96±1,13 ед., катала­зы - 32,86±0,57 ед. Различия показателей как прооксидантного, так и антиоксидантного статуса между группами «благоприятного» и «неблагоприятного» прогноза оказались статистически значимыми (р=0,01) так же, как различия между группами по критерию общей выживаемости (р<0,001).

Таким образом, показатели антиоксидантного-проксидантного ста­туса больных местно-распространенным раком головы и шеи позво­ляют косвенным образом судить о прогнозе заболевания.

ПРИМЕНЕНИЕ МАТЕМАТИЧЕСКИХ МОДЕЛЕЙ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА

РОСТ КЛЕТОЧНОЙ ПОПУЛЯЦИИ IN VITRO

Писаренко Е.М., Котин В.В.¹, Ершов ЮА.¹

ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт оптико-физических измерений», Москва, Росссия

В биологии и медицине важным и трудоемким является процесс подбора оптимальных концентраций цитотоксических препаратов. В данной работе приведен пример применения математических моде­лей для количественной оценки влияния цитотоксических агентов на рост клеточной популяции in vitro.

Материалы и методы. В рамках данной работы сформулированы и сопоставлены с экспериментом два типа математических моделей: экотоксикологическая модель и модель на базе концепции клеточных автоматов. В качестве объекта моделирования рассматривался рост in vitro клеточной популяции Saccharomyces cerevisiae под действием ингибиторов (например, при различных концентрациях соли, содер­жащей ионы AgNO₃).

Результаты. В рамках экотоксикологической модели при помощи дифференциальных уравнений была описана кинетика цепного роста и ингибирования роста клеточной популяции, состоящей из растущих и зрелых особей. В модели учитываются такие параметры, как плот­ность растущих и зрелых особей и набор кинетических коэффициен­тов автоингибирования, рождения, роста и размножения популяцион-ной цепи с учетом влияния концентрации ингибиторов.

В рамках модели клеточных автоматов (КА) сформулированы и реализованы алгоритмы поведения ячейки КА в зависимости от значения кинетических коэффициентов и концентрации ингибитора. Кинетические коэффициенты определяются экспериментально.

Выводы. Полученные при помощи моделирования результаты хорошо согласуются с экспериментальными данными (погрешность не превышает 20%), что позволяет использовать модель для расче­та значений концентраций ингибитора в зависимости от требуемого эффекта воздействия.

КЛИНИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ НАНОСТРУКТУРИРОВАННЫХ ГИДРОКСИАПАТИТОВ В ОНКОЛОГИИ

Решетов И.В., Филюшин М.М., Батухтина Е.В., Ратушный М.В., Севрюков Ф.Е.

ФГУ Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена, Москва, Россия

Для реконструкции тканевых дефектов, образующихся после обширных хирургических вмешательств в настоящее время исполь­зуются различные методы алло- и аутотрансплантации, а также осу­ществляется поиск и разработка новых биосовместимых материалов для восстановления дефектов. Среди множества биоматериалов пер­спективными являются пористые керамические материалы на основе фосфатов кальция в связи с их близостью по составу с внеклеточ­ным веществом кости. Глицерофосфат кальция, входящий в состав биокерамики, является индуктором остеогенной дифференцировки для мезенхимальных стволовых клеток, а пористость обеспечивает развитую поверхность и эффективную неоваскуляризацию.

В МНИОИ им. П.А. Герцена в экспериментах in vitro на модели фибробластов человека, был осуществлен скрининг ряда образцов биокерамики, синтезированной в ИПК РАН. Были отобраны наибо­лее нереактивные образцы, отвечающие современным требовани­ям, предъявляемым к биоматериалам: отсутствие цитотоксичности, наличие выраженных адгезивных свойств, развитая поверхность.

ОНКОХИРУРГИЯ

89

III INTERNATIONAL CONGRESS «TUMOURS OF THE HEAD AND NECK»

В экспериментах in vivo на модели подкожной трансплантации мы­шам линии BDF1 установлено, что на всех сроках наблюдения как макро-, так и микропризнаков отторжения трансплантатов ГАП и ре­акции воспаления вокруг них не наблюдается, что свидетельствует о их биосовместимости.

Полученные в экспериментах результаты позволили перейти к клиническим испытаниям пористой керамической биокерамики

Испытания керамических гранул на основе фос­фата кальция производства ИМЕТ РАН были проведены на базе отде­ления микрохирургии ФГУ МНИОИ им. П.А. Герцена на 20 пациентах (табл.), находящихся в стационаре на разных этапах специального противоопухолевого лечения.

Таблица. Распределение больных по группам

Диагноз	Операция	Количество больных
Рак слизистой полости рта с деструкцией тела нижней челюсти. Состояние после химиолучевой терапии.	Резекция слизистой полости рта с плоскостной резекцией тела нижней челюсти и восстановлением альвео­лярного отростка нижней челюсти.	8
Рак решетчатого лабиринта. Состояние после курса предо­перационной лучевой терапии и нерадикального хирурги­ческого лечения. Остаточная опухоль.	Краниофациальная резекция.	3
Рак кожи волосистой части головы с вовлечением костей свода черепа.	Удаление опухоли кожи скальпа с резекцией костей свода черепа.	5
Опухоли с вовлечением кост­ных структур области головы и шеи других локализаций.	Удаление опухоли с одномоментной реконструкцией костным аутотранс-плантатом.	4

Послеоперационный период оценивали: по клиническому течению раневого процесса (наличию отека и гиперемии слизистой оболоч­ки в области хирургического вмешательства, состоятельности швов, общей температурной реакции организма), клинико-лабораторным показателям (общий анализ крови, биохимический анализ крови), рентгенологически (рентгенография и КТ-картина состояния облас­ти пластики костного дефекта и окружающих тканей). Во всех 20 случаях отмечено заживление операционной раны первичным натя­жением; швы сняты на 10-14 сутки. Контрольный осмотр и рентгено­логический контроль осуществляли через 1-2 мес.

Медицинские испытания керамических гранул на основании фос­фата кальция производства ИМЕТ РАН показали целесообразность их использования в онкологии для восстановления костных дефектов при хирургических вмешательствах. Материал удобен и прост в при­менении, обеспечивает адекватное заполнение костных дефектов. Аллергических и местновоспалительных реакций при использовании керамических гранул на основе фосфата кальция не отмечено.

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ НОВЫХ МЕТОДОВ МИКРОСКОПИИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПАПИЛЛЯРНОГО РАКА ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Решетов И.В., Тычинский В.П., Славнова Е.Н., Сухарев С.С., Клемешов И.В., Иванов Ю.С., Голубцов А.К.

ФГУ Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена, Москва, Россия

Цель настоящего исследования - изучение возможностей новых методов микроскопии: метода когерентной фазовой микроскопии и атомно-силовой микроскопии в диагностике папиллярного рака щи­товидной железы.

Материалом для исследования послужили соскобы с опухолей и окружающих тканей щитовидной железы, полученные от 19 больных папиллярным раком щитовидной железы. Для анализа морфологии и прижизненной динамики клеток использовали когерентный фазовый микроскоп (КФМ «Эйрискан»). Для анализа микрорельефа поверх­ностей клеток использовали исследовательский комплекс Интеграна на основе атомно-силового микроскопа (АСМ) производства «ЗАО НТ НДТ»(г.Зеленоград, Россия).

Использование нового метода КФМ позволило обнаружить раз­личия между нормальными клетками и клетками рака в фазовых изображениях, а также в спектрах флуктуации фазовой толщины, отражающих функциональное состояние клетки.

Новые возможности метода КФМ проявились в: - исследова­нии живых, неокрашенных клеток; получении более четких границ цитоплазмы, ядра, ядрышек, что позволило произвести точные морфометрические измерения размеров ядра, ядрышек в полуав­томатическом режиме; измерении ядрышко-ядерного соотношения суммы значений фазовой толщины; в клетках папиллярного рака щитовидной железы оно в 2 раза больше, чем в нормальных клетках; получении объемных изображений клеток, исследовании поверхнос­тей клеток и ядер, при этом раковые клетки имели неправильную форму и бугристую поверхность; исследовании оптических свойств ядра и цитоплазмы, что позволило более детально изучить струк­туру цитоплазмы, хроматина, определить вутриядерные включе­ния. В ядрах обнаруживаются включения цитоплазменной природы, что особенно важно в диагностике папиллярного щитовидной железы.

Измерение флуктуаций фазовой толщины (ФТ) позволило по­лучить дополнительную информацию о функциональном состоянии живых клеток, свидетельствующую о различии метаболических про­цессов в нормальных и раковых клетках.

В «нормальных» клетках щитовидной железы и клетках папил­лярного рака наблюдались периодические изменения функциональ­ной активности в ядрышке, ядре и цитоплазме: при снижении ме­таболических процессов в ядре они увеличивались в цитоплазме, и наоборот. Эти изменения сопровождались явлениями секреции.

Использование АСМ позволило получить различия для нормаль­ных клеток и клеток папиллярного рака щитовидной железы.

Новые возможности проявились в разнице микрорельефа повер­хностей опухолевых клеток. При папиллярном раке на поверхности ядра клеток в отличие от нормальных клеток четко определяются от 1 до 4 ядрышек высотой от 50 до 150 нм. В ядрах части клеток папил­лярного рака определяются внутриядерные включения цитоплазмы, глубина которых позволяет дифференцировать их с дистрофически­ми изменениями.

Таким образом, преимущество методов КФМ и АСМ состоит в возможности объективизировать данные цитологического иссле­дования, получить количественные значения морфологических пара­метров и на их основании делать статистически более достоверные выводы о патологическом процессе и прогнозе его течения.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЙ ТИТАНОВЫХ ПЛАСТИН С НАНОСТРУКТУРНЫМ ПОКРЫТИЕМ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Решетов И.В., Штанский Д.В., Филюшин M.M., Сухарев С.С.

МНИОИ им. П.А. Герцена. Государственный институт стали и сплавов (Технологический университет), Москва, Россия

Лучевая и химиотерапия, необходимые при комплексном лече­нии опухолевой патологии, значительно уменьшают регенераторые способности организма и ведут в 10-15% к отторжению синтети­ческих материалов, применяемых при реконструкции костных де­фектов челюстно-лицевой зоны. Для реконструкции тканевых дефек­тов, образующихся после обширных хирургических вмешательств,

90

ONCOSURGERY

III КОНГРЕСС C МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «ОПУХОЛИ ГОЛОВЫ И ШЕИ»

в настоящее время используются различные методы алло- и ауто­трансплантации, а также осуществляется поиск и разработка новых биосовместимых материалов для восстановления дефектов. Сре­ди множества биоматериалов перспективными являются пористые керамические материалы на основе фосфатов кальция в связи с их близостью по составу с внеклеточным веществом кости. Совре­менные биоматериалы, используемые в реконструктивной хирургии, должны обладать высокой прочностью, повышенной коррозийной и износостойкостью, хорошей биологической совместимостью и неток­сичностью. В то время как многие металлы и сплавы соответствуют многим из этих требований, они обеспечивают достаточно неплотное соединение между металлической поверхностью и костной тканью. Для обеспечения наиболее эффективного контакта между костными фрагментами и имплантатом необходимо наличие многофункцио­нального биологически активного наноструктурного покрытия на по­верхности имплантата. На базе МНИОИ им. П.А. Герцена проведены экспериментальные работы по имплантации в область костного де­фекта титановых пластин с различными вариантами биокерамичес­кого напыления. Использовались две группы крыс, каждая из которых включала четыре животных. Животным выполнялась трепанация те­менной кости размером до 3-4 мм с замещением костного дефекта титановой пластиной соответствующего размера с наноструктурным биокерамическим напылением и титаном без напыления.

Животные обеих групп выводились из эксперимента на 15 и 30 сутки с предварительным рентгенологическим исследованием и пос­ледующим морфологическим исследованием области хирургическо­го воздействия.

Данные рентгенологического исследования показали отсутствие патологической периостальной реакции вокруг имплантации титана в обеих группах и восстановление опорной функции резецированного костного фрагмента.

При гистологическом исследовании и электронной микроскопии имплантированных образцов титана (без напыления и с биокерами­ческим напылением) выявлено плотное заселение пористого био­керамического покрытия остеобластами с началом неоостеогенеза; подобной картины на поверхности титана без биокерамического пок­рытия не отмечено.

Полученные в эксперименте данные свидетельствуют о принци­пиальной возможности использования некоторых образцов титана с биокерамическим напылением при замещении костных дефектов при реконструктивно-пластических операциях на челюстно-лицевой зоне.

ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ БАЗАЛЬНО-КЛЕТОЧНОГО РАКА КОЖИ ГОЛОВЫ И ШЕИ

Романко Ю.С., Попучиев В.В.

Медицинский радиологический научный центр, Обнинск, Россия

Фотодинамическая терапия (ФДТ) основана на взаимодейс­твии трех нетоксичных компонентов - фотосенсибилизатора (ФС), способного селективно накапливаться в опухолевой ткани, света и кислорода. При локальном облучении опухоли светом определенной длины волны, соответствующей пику поглощения сенсибилизатора, в опухоли начинается фотохимическая реакция с образованием высо­коактивных биологических окислителей - синглетного кислорода и других свободных радикалов, оказывающих токсическое воздействие на строму и паренхиму опухолевого узла. Противоопухолевые эф­фекты данного вида лечения обусловлены комбинацией прямого фотоповреждения клеток, разрушения сосудистой сети опухоли и активации иммунного ответа. Базально-клеточный рак кожи (БКРК) является наиболее распространенным эпителиальным новообразова­нием кожи, при лечении которого традиционными методами развитие рецидивов, по данным разных авторов, может достигать 48%.

Цель данной - работы изучить эффективность фотодинамической терапии с применением фотосенсибилизаторов различных классов при лечении базально-клеточного рака кожи.

Результаты ФДТ 139 больных БКРК с использованием ФС «Фо-тогем», «Фотосенс», «Фотолон» и «Фотодитазин» показали, что непосредственная регрессия опухоли отмечалась в 76, 76, 85 и 95%, а Зх-летняя безрецидивная выживаемость составила 54,0, 71,0, 90,4 и 92,3% соответственно. Установлена целесообраз­ность применения ФДТ с предварительным (за 3 часа до сеанса облучения) внутривенным введением ФС «Фотолон» из расче­та 2,5 мг/кг и ФС «Фотодитазин» из расчета 0,8 мг/кг веса за 1,5 часа до сеанса облучения. Показано, что использование методик с применением ФС хлоринового ряда практически исключает разви­тие осложнений, побочных реакций и значительно сокращает сроки проведения радикального лечения больных раком кожи.

АКТИВНОСТЬ ПРОТЕАСОМ И ИХ СОСТАВ ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ

ГОЛОВЫ И ШЕИ

Спирина Л.В., Кондакова И.В., Чойнзонов Е.Л., Чижевская С.Ю., Мухамедов М.Р., *Шарова Н.П.

НИИ онкологии СО РАМН, * ИБР им. Н.К. Кольцова РАН, Томск, Россияк

Развитие плоскоклеточных карцином головы и шеи (ПКГШ) связано с нарушением регуляции основных клеточных процессов (пролиферация, апоптоз и др.), которое регулируется внутриклеточ­ной протеасомной системой.

Материалы и методы исследования. Исследована активность протеасом и их состав у 23 больных ПКГШ стадии T_1-3N_0-3M₀ в опу­холи и неизмененной ткани флюориметрическим методом и методом Вестерн блоттинг.

Результаты. Тотальная активность и активность пула 20S про-теасом в опухолевой ткани была достоверно выше по сравнению с окружающей неизмененной тканью. Содержание а1а2а3а4а5а6а7 субъединиц протеасом в опухоли было значительно ниже и состави­ло 38,1±7,4% от неизмененной ткани. В то же время содержание имунных LMP7 и LMP2 субъединиц было выше и составило соответс­твенно 264,0±26,9%; и 170,2±18,0 от из уровня в неизмененной ткани. Содержание комплекса PA28P, характеризующего количество 26S протеасом, увеличивалось на 41% у больных со стадией Т_3-4 по сравнению с больными Т_1-2, тогда как процентное содержание LMP7 снижалась в этих группах больных на 30,6%.

Выводы. Высокая активность протеасом в ткани опухоли наблюдалась при низком содержании белка. Вероятно, увеличение активности протеасом и пула 20S происходит за счет увеличения в составе протеасом субъединиц LMP7 и LMP2. Изменение содер­жания PA28P и LMP7 при увеличении размера опухоли может иметь практическое значение.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 08-04-00616).

ВЕЛИЧИНА ОТНОСИТЕЛЬНОЙ ЯРКОСТИ СИГНАЛА ПРИ АУТОФЛУОРЕСЦЕНТНОМ ИССЛЕДОВАНИИ

КЕРАТОПАПИЛЛОМ КОЖИ И МЕЛАНОМ

УЗЛОВОГО ТИПА СТРОЕНИЯ

Стаханов М.Л., Вельшер Л.З., Мазурова М.П., Астра-ханцев А.Ф., Решетов Д.Н., Цалко С.Э.

Кафедра онкологии и лучевой терапии ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава, Центральная клиническая больница № 2 им. Н.А. Семашко ОАО «РЖД», Москва, Россия

При первичной диагностике доброкачественных и злокачествен­ных опухолей кожи, особенно в случаях сходного макроскопического типа строения, дополнительные методы исследования, в том числе и методы лазерной диагностики, имеют большое значение.

С помощью комплекса флуоресцентной диагностики мы проводим неинвазивную дифференциальную диагностику доброкачественных и злокачественных опухолей кожи.

ОНКОХИРУРГИЯ

91

III INTERNATIONAL CONGRESS «TUMOURS OF THE HEAD AND NECK»

При гистологическом исследовании кератопапиллом определя­ются характерные сосочковые выросты, покрытые высокодиффе-ренцированным многослойным плоским эпителием. На поверхности сосочковых выростов, а также между ними нередко обнаруживаются в большом количестве роговые чешуйки. Гиперкератоз резко выра­жен. Эпителий содержит все слои, свойственные нормальному эпи­дермису и образует акантотические разрастания в глубь дермы.

Величина относительной яркости при исследовании кератопа­пиллом кожи имеет вариацию от 16,96 до 246,31%, составляя в среднем 103,13±28,86%.

При гистологическом исследовании меланом определяется типичная морфологическая картина узловой формы опухоли в фазе вертикального роста, представленной, по нашему материалу (35 случаев), преимущественно эпителиоподобными и, в меньшей мере, веретенообразными клеточными элементами.

При аутофлуоресцентном исследовании меланом величина от­носительной яркости этого типа опухоли имеет вариацию от 9,10 до 44,02%, составляя в среднем 22,63±4,23%.

При сравнении средних показателей величин относительной яркости этих двух типов опухолей кожи определяется статистически значимое различие (t=2,76; р<0,05). Различие в средних показа­телях - 80,5%. Это различие, возможно, обусловлено значительным усилением возвратного сигнала, которое связано со значительной площадью отражения

Таким образом, величина значений относительной яркости кривой аутофлуоресценции обусловлена гистологическими особенностями (различиями) строения кератопапиллом и меланом узлового типа строения, что может быть использовано при дооперационной диа­гностике.

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ БИОТЕРАПИИ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ ОПУХОЛЕЙ ГОЛОВЫ И ШЕИ

Стрельцова Е.А., Решетов И.В., Дайхес Н.А., Каркищенко Н.Н., Семёнов Х.Х.

ФГУ Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена, Москва, Россия

Для разработок новых методов терапии злокачественных опухолей требуются модели, отвечающие следующим характеристикам:

1) моделирование эксперимента, применимого у человека;

2) использование человеческих образцов опухолей; 3) отсутс­твие у лабораторных животных реакций отторжения чужеродной ткани.

Материалы и методы. Для создания экспериментальной мо­дели требуется животное, позволяющее по своим иммунологичес­ким свойствам выполнить подсадку чужеродной ткани трансгенным животным (бестимусным мышам). В искусственно созданный дефект костей черепа имплантируется образец опухоли человека с экс­прессией EGF-r. При отсутствии реакции отторжения исследователь получает наглядный образец интересующего его гистологического типа опухоли.

Методика эксперимента заключается в следующем: под опти­ческим увеличением через срединный продольный разрез кожи в лобно-теменной области формируется надкостничный лоскут ме­тодом гидропрепаровки, после чего создаётся дефект в теменной кости диаметром около 0,3-0,5 мм². Имплантированная культура опухоли укрывается заранее сформированным надкостничным лоскутом; далее производится послойное ушивание раны. Живот­ные подлежат ежедневному послеоперационному мониторингу.

Полученные результаты. В МНИОИ им. П.А. Герцена совместно с ГУ НЦ БМТ РАМН по разработанной нами методике было проопе­рировано 40 животных. Пять животных погибло на этапе вводного наркоза и в раннем послеоперационном периоде.У остальных живот­ных в послеоперационном периоде осложнений не выявлено. Имп­лантируемая опухолевая ткань прижилась. На 7-21 сутки животные выводились из эксперимента, морфологический (иммуногистохи-мия, иммуноцитохимия) анализ имплантируемой опухоли проде­монстрировал сохранение её биологических свойств.

Выводы. Созданная экспериментальная модель опухоли головы и шеи полностью отвечает требованиям для проведения опытов, посвященных проблемам биологии злокачественных опухолей. Сохранение биологических свойств опухоли является основным критерием, определяющим дальнейшую возможность работы ис­следователя.

ОСОБЕННОСТИ ГЕМОПОЭЗА

У БОЛЬНЫХ ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ ГОЛОВЫ И ШЕИ (ПРГШ)

ПРИ НАЛИЧИИ КОСТНОМОЗГОВЫХ МИКРОМЕТАСТАЗОВ

Тимонина Е.Г.¹, Подвязников С.О.¹, Чегринец О.А.², Френкель М.А.², Колбацкая О.П.², Тупицын Н.Н.²

¹ - ГОУ ДПО РМАПО, Москва,

² - ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва, Россия

Применение современных методов молекулярной диагностики микрометастазов ПРГШ на основе экспрессии гена Е48 (продукт специфичен для многослойного плоского и переходного эпите­лия) позволяет обнаружить поражение костного мозга в 40% случаев (D. Colnot et al., 2004). Нами было проведено исследо­вание гемопоэза у 38 больных ПРГШ. При анализе миелограмм приблизительно у половины больных (41%) отмечалось снижение клеточности аспирата костного мозга. Независимо от числа ми-елокариоцитов было констатировано уменьшение числа молодых форм нейтрофилов, увеличение сегментоядерных элементов, лимфоцитов и моноцитов. В ряде случаев определялось уве­личение числа мегакариоцитов. В трех случаях была выявлена нормоцитарная нормохромная анемия при IV стадии заболевания с наличием метастатического поражения лимфатических узлов. При анализе миелограмм этих больных, сумма клеток красного ряда была в пределах нормы, однако индекс созревания нормоблас-тов у двух из них был снижен.

Цитологическим методом метастатического поражения костно­го мозга не выявлено. Стандартным методом ОТ-ПЦР экспрессия гена Е48 не выявлялась (РНК из 0,4-5,4 х 10⁷ миелокариоцитов). С целью повышения чувствительности ОТ-ПЦР нами на модель­ной системе (клетки линии А431) были использованы высоко­чувствительные методы иммуно- и радиоактивного проявления. В результате проведенного исследования у 17 больных микроме­тастазы выявлены в 6 случаях (35,3%). Достоверных различий по большинству показателей миелограммы и по клеточности костно­го мозга между группами больных с поражением и без поражения костного мозга не выявлено. У больных с поражением костного мозга (МТС+) было достоверно выше суммарное количество кле­ток гранулоцитарного ростка (72,3 и 61,6%, р=0,03) за счет всех (зрелых и незрелых) морфологически распознаваемых форм, достоверно реже отмечалось повышение процентного содержа­ния лимфоцитов в костном мозге. У всех больных с наличием МТС (100%) были снижены полихроматофильные нормобласты (в группе сравнения - 55%, р=0,02) и процент этих клеток был более низким (4,6 и 8,4%, р=0,05).

В настоящее время проводится анализ клинической значимос­ти выявления микрометастазов ПРГШ данным высокочувстви­тельным методом.

92

ONCOSURGERY

III КОНГРЕСС C МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «ОПУХОЛИ ГОЛОВЫ И ШЕИ»

СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СЫВОРОТКЕ И СЛЮНЕ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ГОРТАНИ

Трофимов Е.И.¹, Копченко О.О.¹, Фуки Е.М.¹, Мустафаев Д.М.²

¹ ФГУ «Научно-клинический центр оториноларингологии Росздрава»,

² Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского, Москва, Россия

Для успешной разработки методов иммунотерапии, направлен­ной на профилактику рецидивов рака, а также послеоперационных гнойных осложнений у больных раком гортани, важное значение имеет изучение механизмов местной и общей иммунной систе­мы. Установлено, что при патологических процессах в гортани изменяется, наряду с общей иммунологической реактивностью, и локальная иммунная защита, что отражается на количествен­ном содержании иммуноглобулинов в различных секретах (слю­на, слезы, носовой секрет).

Материалы и методы. Было проведено сравнительное опреде­ление уровня иммуноглобулинов класса А, М, G в сыворотке крови и секреторного иммуноглобулина А в слюне у больных раком гортани и в группе здоровых лиц. Слюну собирали утром натощах в пробирку в течение 1 минуты. Затем кровь и слюну центрифугировали в тече­ние 10 минут, замораживали сыворотку и надосадочную жидкость, хранили до момента исследования. Количество иммуноглобулинов отдельных классов определяли методом ИФА.

Результаты. Исследование сывороточных иммуноглобулинов у больных раком гортани показало, что уровень IgA при всех стадиях заболевания достоверно выше, чем у здоровых людей. Отмечается также увеличение концентрации IgG по мере нарастания распростра­ненности опухолевого процесса. Напротив, уровень IgM в сыворотке больных II стадии не отличается от его уровня у здоровых лиц, но у больных III - IV стадии он значительно снижается. Секреторный имму­ноглобулин А в слюне больных раком гортани увеличен в 2 - 2,5 раза по сравнению со здоровыми людьми.

Выводы. 1. У больных раком гортани по мере увеличения распро­страненности опухолевого поражения значительно нарастает уровень сывороточного !дА, в меньшей степени - IgG, и снижается уровень !дМ. Концентрация секреторного IgA, найденного только в слюне, в 2 - 2,5 раза превышает уровень его у здоровых лиц.

2. Через 1 месяц после радикального хирургического лечения уро­вень сывороточных иммуноглобулинов А, G соответствует таковому у здоровых людей. Уровень IgM у половины обследованных больных остается сниженным. В слюне концентрация секреторного IgA снижа­ется в 2 раза, приближаясь к уровню здоровых людей.

СТИМУЛЯЦИЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПОЛИОКСИДОНИЕМ У БОЛЬНЫХ

РАКОМ ГОРТАНИ

Трофимов Е.И.¹, Копченко О.О.¹, Фуки Е.М.¹, Мустафаев Д.М.²

¹ ФГУ «Научно-клинический центр оториноларингологии Росздрава»,

² Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского, Москва, Россия

Известно, что развитие опухоли в организме сопровождается иммунодефицитом, который выражается в снижении числа и функци­ональной активности клеточных элементов (Т- и В-лимфоцитов, мак­рофагов). Поэтому для стимуляции иммунной системы в настоящее время используют в онкологии различные адъюванты (левамизол, интерферон, интерлейкины и др.), активирующие, преимущественно, Т-систему клеток, макрофаги, В-систему клеток, ответственных за гуморальный иммунитет.

Учитывая вышеизложенное, представляет интерес использо­вание полиоксидония для активации иммунной системы у больных раком гортани с целью профилактики послеоперационных гнойных осложнений. Было проведено сравнительное клинико-лаборатор-ное обследование 2 групп больных раком гортани, отобранных ме­тодом рандомизации. В обе группы вошли мужчины с III стадией заболевания в возрасте от 30 до 60 лет. Больные первой группы в предоперационном периоде были иммунизированы полиоксидо-нием, который непосредственно вводили в ткань небных миндалин после их предварительной обработки 3% раствора йода. Иммуни­зировали трехкратно по 2-2-2 мл с интервалом между введениями 3 дня и окончанием курса иммунизации за 5 дней до операции. Всем больным, иммунизированным и неиммунизированным, были проведены следующие оперативные вмешательства: фронтолате-ральная резекция, горизонтальная резекция гортани, ларингэктомия.

Сравнительное наблюдение за двуми группами больных после проведенного радикального лечения показало, что через 1 - 1,5 месяца после окончания иммунизации и оперативного удаления опухоли уровень сывороточных иммуноглобулинов мало чем отли­чается от здоровых людей, что является хорошим прогностическим признаком. В группе неиммунизированных больных наблюдается дис-глобулинемия, выражающаяся в значительном увеличении уровня IgA и снижении IgG и особенно IgM.

Интратонзиллярная иммунизация больных полиоксидонием ведет к активации местной иммунной защиты. Отсюда видно, что полиок-сидоний является неспецифическим адъювантом В-лимфоцитов, стимулирующим синтез IgM. В результате проведенной иммунизации также уменьшилась частота развития послеоперационных гнойных осложнений.

РЕЗЕРВЫ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ОНКОПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ

В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

Шаров С.В.

ГУЗ «Краевой клинический онкологический диспансер» Департамента здравоохранения Краснодарского края, Краснодар, Россия

В настоящее время качество организации и проведения онкоп-рофилактических осмотров оставляет желать лучшего по ряду причин: не все первичные больные посещают смотровые каби­неты, нагрузка в них недостаточна, в большинстве кабинетов не обеспечивается двухсменная работа.

Цель. Проанализировать работу смотровых кабинетов в крае и наметить пути совершенствования их деятельности по ранней диагностике опухолей визуально обозримых локализаций.

Материалы и методы. Проведен анализ работы всех смотро­вых кабинетов Краснодарского края за 2008 г.

Результаты. В Краснодарском крае из общего числа больных с впервые в жизни установленным диагнозом ежегодно выяв­ляются на профилактических осмотрах лишь 6-7% пациентов. Приходится констатировать, что в целом показатели активного выявления злокачественных новообразований не соответствуют современным возможностям здравоохранения, что объясняется, прежде всего, слабым взаимодействием онкологической службы и общей лечебной сети. Показатель варьирует в административ­ных территориях края от 0 до 50%. Следовательно, анализ пока­зателей активной диагностики злокачественных опухолей в крае свидетельствует о полном отсутствии в некоторых районах систе­мы профилактических и скрининговых обследований населения.

Обращает на себя внимание значительное сокращение числа смотровых кабинетов с 218 в 1996 г. до 98 в 2008 г. На сегодняш­ний день в Краснодарском крае в 46 муниципальных образованиях (включая г. Краснодар) функционируют 88 женских смотровых ка­бинетов, 3 - мужских и 7 - смешанного приема, еще в 3 районах фун­кции женского смотрового кабинета выполняют врачи акушеры-ги­некологи в общем потоке пациентов, в 7 районах и 17 поликлиниках

ОНКОХИРУРГИЯ

93

III INTERNATIONAL CONGRESS «TUMOURS OF THE HEAD AND NECK»

г. Краснодара профилактические осмотры мужчин осуществляют врачи - урологи или хирурги в общем потоке с приемом паци­ентов. Вообще не работают смотровые кабинеты в Павловском, Кавказском и Кореновском районах, а также в г.Туапсе.

Нами проанализированы сведения о смотровых кабинетах 46 территорий Краснодарского края. Анализ показал, что в среднем на один смотровой кабинет приходится 24,2 тыс. женского населе­ния (за вычетом детской возрастной категории). Этот показатель в Белоглинском, Щербиновском, Староминском, Успенском, Кав­казском, Тимашевском, Тихорецком районах колеблется от 15 до 20 тыс., в г. Кропоткине, Абинском, Апшеронском, Кореновском, Курганинском, Кущевском, Новокубанском, Отрадненском, Те-мрюкском и других районах превышает 25 тыс., в Крыловском, Приморско-Ахтарском районах составляет менее 5 тыс.

В 2008 г. всего по краю осмотрено в смотровых кабинетах 470563 человека, процент выявления злокачественных новообразований составил 0,2%, предраковых заболеваний - 4,7%.

Диагностика ранних форм опухолей в значительной степени зависит от врачей первичного звена. Профилактическое обследо­вание пациентов должно носить массовый характер, смотровой кабинет должен работать в каждом учреждении здравоохране­ния, ведущим амбулаторный прием пациентов, работа смотрового кабинета должна быть организована в две смены. Однако наличие смотрового кабинета в медицинском учреждении не гарантирует качественного раннего выявления злокачественных новообразо­ваний. В подавляющем большинстве в смотровых кабинетах края осмотр медицинским работником ограничивается гениталиями как у женщин, так и у мужчин.

В организации женских смотровых кабинетов края существует еще одна проблема - цитологический скрининг рака шейки матки. Мазки с шейки матки и цервикального канала в женском смотро­вом кабинете должны браться у 100% женщин вне зависимости от возраста или наличия видимой патологии. Однако этот принцип соблюдается далеко не во всех административных территориях Кубани. В ряде районов существует возрастной ценз на взятие мазков для скрининга рака шейки матки: например, только у жен­щин старше 40 лет, или выборочно, у части осмотренных жен­щин (особенно в тех территориях, где нет своей цитологической службы).

Критерием оценки профилактической работы специалистов муниципального здравоохранения в данном направлении могут служить показатели выявляемости и запущенности различных видов данной патологии, а также показатели смертности в конк­ретных муниципалитетах.

Выводы. Поскольку здравоохранение края функционирует в условиях ограниченности бюджета, стратегической линией раз­вития и совершенствования онкологической помощи населению края является рациональное использование всех существующих ресурсов (организационного, кадрового и материально-техничес­кого порядка), причем не только онкологической службы, но и всего здравоохранения.

На сегодняшний день без качественно организованной рабо­ты системы смотровых кабинетов, подкрепленной на местном уровне действующей цитологической службой, решить проблемы раннего выявления злокачественных новообразований не пред­ставляется возможным. Успех организации борьбы против рака на современном этапе, а также снижение смертности от онколо­гических причин зависят от профилактики, ранней диагностики и, как следствие, своевременного лечения больных со злокачест­венными опухолями и предопухолевыми заболеваниями.

АССОЦИАЦИЯ ПРЕДОПУХОЛЕВЫХ И ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МИНДАЛИН И ГОРТАНИ С ОНКОГЕННЫМИ ВИРУСАМИ ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА И ЭПШТЕЙНА-БАРР

Шилова О.Ю., Л.Н. Уразова, ЕЛ. Чойнзонов

ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, Томск, Россия

Предопухолевые и воспалительные заболевания миндалин и гортани, такие, как папилломатоз, хронический гиперплас­тический ларингит и декомпенсированная форма тонзиллита, на долю которых приходится от 10-40% для папилломатоза гортани, 65-70% - для гиперпластического ларингита и 4-10% - для тонзил­лита, представляют серьезную угрозу для здоровья человека, пос­кольку с высокой вероятностью (частотой) малигнизируют в сроки от 6 мес. до 15 лет. Однако в литературе остается практически не­освещенным вопрос об ассоциации данных заболеваний с вирусами папилломы человека и Эпштейна-Барр, обладающими онкогенной потенцией и способными инициировать процесс трансформации ин­фицированных клеток. В связи с данным фактом нам представилось актуальным оценить частоту детекции данных вирусов в морфологи­чески измененной ткани миндалин и гортани и взаимосвязь вирусной компоненты с клинико-анамнестическими показателями у больных.

Материалы и методы. Определение частоты встречаемости он-когенных вирусов папилломы человека 6, 11, 31, 33, 16 и 18 типов в патологически измененной ткани больных с декомпенсированной формой хронического тонзиллита (n=35), папилломатозом минда­лин (n=7), проходивших лечение в ЛОР-отделении Городской боль­нице №3 г. Томска, а также лиц с хроническим гиперпластическим ларингитом (n=22) и папилломатозом гортани (n=6), находившихся на амбулаторном лечении в отделении опухолей головы и шеи ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН г. Томска, проводили методом ПЦР. Уровни антител к антигенам литической инфекции ВЭБ (вирусному капсидному и комплексу ранних антигенов) определяли методом не­прямой иммунофлюоресценции. Контрольная группа представлена 56 лицами без морфологических изменений ткани миндалин и гортани (n=56). Группы сопоставимы по возрасту и полу.

Результаты. ДНК вируса папилломы человека была выявлена в патологически измененной ткани миндалин 2,8 и 4,5% больных тонзиллитом и хроническим гиперпластическим ларингитом соот­ветственно и 72 и 33% больных, страдающих папилломатозом мин­далин и гортани. Следует отметить, что у единственного пациента с тонзиллитом, ткань миндалины которого была инфицированна ВПЧ, выявлена микст-инфекция из ВПЧ 6, 11 и 18, тогда как случаи вы­явления смешанной инфекции у больных папилломатозом миндалин были отмечены у 3-х больных. Так, у 2-х больных в ткани папилло­мы зафиксированы ВПЧ 6 и 11 и у одного пациента - ВПЧ 16 и 18. В морфологически измененной ткани больного гиперпластичес-тическим ларингитом также выявлена микст-инфекция из ВПЧ 6 и 11. Случаи детекции моноинфекции ВПЧ были характерны только для больных папилломатозом миндалин гортани: в первом случае детектирован ВПЧ 6 и во втором - ВПЧ 31. В контрольной группе во всех трех случаях выявлена микст-инфекция: в двух - ВПЧ 6 и 11 и в одном - ВПЧ 31 и 33. Значимых различий в частоте инфициро-ванности ВПЧ в группе больных воспалительными и хроническими заболеваниями с контрольной группой не выявлено (р>0,05).

Уровень антител к антигенам литической инфекции вируса Эпш-тейна-Барр является показателем реактивности иммунной системы больного и, одновременно, индикатором формы существования ви­руса в организме. Несмотря на частое обострение тонзиллита, в изу­чаемой группе выявлено всего 9% лиц с высоким уровнем антител класса G к вирусному капсидному антигену. Значимых различий с контрольной группой показано не было.

Корреляционный анализ не выявил зависимости между инфици-рованностью ткани миндалин ВПЧ, высокими значениями антител к антигенам литической инфекции ВЭБ и такими клинико-анамнести-ческими показателями, как возраст, пол больных, частота рецидиви­

94

ONCOSURGERY

III КОНГРЕСС C МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «ОПУХОЛИ ГОЛОВЫ И ШЕИ»

рования и оперативных вмешательств по поводу обострения заболе­вания, а также курсов проведенной терапии.

Выводы. Таким образом, можно предположить, что изученные онкогенные вирусы вносят существенный вклад в развитие папилло-матоза миндалин, тогда как вопрос об их участии в возникновении и прогрессировании такого заболевания, как декомпенсированный тонзиллит остается открытым.

ОПУХОЛЬ-СПЕЦИФИЧЕСКИЕ НАНОКОНТЕЙНЕРЫ ДЛЯ НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА В ОЧАГ ГЛИОМЫ

Юсубалиева Г.М.¹, Баклаушев В.П.¹, Куприянов Д.А.², Пирогов ЮА.², Чехонин В.П.¹, Гурина О.И.

¹ Лаборатория иммунохимии ФГУ «ГНЦССП Росздрава», Центр магнитной томографии и спектроскопии,

² МГУ им. Ломоносова, Москва, Россия

Мультиформная глиобластома человека характеризуется быстрым инвазивным ростом и высокой частотой послеопераци­онных рецидивов. Средняя выживаемость пациентов с глиоблас-томой не превышает года с момента постановки диагноза. Для ранней диагностики заболевания крайне необходимо создание высокочувствительных опухоль-специфических контрастных МРТ-агентов.

В экспериментах на крысах Вистар мы воспроизвели модель С6 глиомы,близкуюпоморфологическимсвойствамиспектруэкспрес-сируемых белков мультиформной глиобластоме человека. Динами­ческий иммуногистохимический анализ GFAP на срезах мозга крыс с глиомой показал формирование реактивного астроглиоза с седь­мых суток роста опухоли, сохраняющегося вплоть до гибели живот­ных. Лазерная конфокальная микроскопия выявила сопровождение реактивными астроцитами мелких участков инвазии, невидимых на МРТ, но являющихся источником рецидивов. При введении ме­ченных ¹²⁵I анти-GFAP антител в системный кровоток методами анализа радиоактивности в органах и контактной авторадиогра­фии на срезах мозга крысы с глиомой С6 зарегистрировано их достоверное накопление в области повышенной продукции анти­гена-мишени (периопухолевом пространстве).

Для нейровизуализации применили Gd-содержащие иммуно-липосомы на основе антител к GFAP и IgG. Через каждые 7 суток крысам с глиомой проводилось МРТ-исследование на томографе BRUKER Biospec, 7T. Накопление специфических иммунолипосом в области презентации антигена (GFAP) сравнивали с накоплени­ем неспецифических векторов и Магневиста. Полученные резуль­таты свидетельствуют о высокой перспективности применения иммунолипосом на основе анти-GFAP антител для селективной доставки диагностических и лекарственных препаратов в очаг мультиформной глиобластомы.